1．自然沉降法　

人外周血红细胞与白细胞的比例约为6000～1000:1，两类细胞的沉降速度不同，据此加以分离。自然沉降法是利用红细胞自然沉降率较快加以分离。该法简便易行，对细胞损伤少，但纯度差。

【试剂及配制】

（1） 无Ca²⁺、Mg²⁺ Hank’s液

（2） 含10%～20% 灭活小牛血清Hank’s液

【操作方法】

（1） 取静脉血2ml，放入加有抗凝剂的试管中，轻轻混匀;

（2） 将试管直立静置于室温或37℃温箱中30～60min，待红细胞自然沉降。此时可见试管中的悬液分3层，上层为淡黄色血浆，底层为红细胞，在紧贴红细胞层上有一呈灰白色的白细胞层；

（3） 用毛细管吸取位于红细胞层上面的富含白细胞的细胞悬液，移入另一试管中；

（4） 加入无Ca²⁺、Mg²⁺Hank’s液至离试管口3cm处，混匀，以水平离心机2000r/min 离心10min，弃上清，同法在洗涤两次；

（5） 沉淀细胞用适量10%～20% 灭活小牛血清的Hank’s液重悬，计数，配成所需的细胞浓度的悬液，一般常用2×10⁶/min。

2．加速红细胞沉降法　

利用高分子量的聚合物促使红细胞凝聚成串钱状，从而加速红细胞沉降，使之与白细胞分离。常用的高分子聚合物有明胶、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）及甲基纤维素等。

【试剂及配制】

（1） 3%明胶（粘度为25泊以上）：选取明胶，用生理盐水配成3%溶液，置沸水浴加热溶解，分装，高压蒸汽灭菌8磅15～20min。

（2） 6%右旋糖酐（分子量200～400KD）：用生理盐水配制。

【操作方法一】

（1） 取抗凝静脉血加入等量3%明胶盐水溶液中，混匀；

（2） 将试管直立静置室温或37℃温箱中30～60min，利用明胶与红细胞的粘合作用，促使红细胞快速下沉，而白细胞留在明胶溶液中；

（3） 用毛细吸管吸取富含白细胞的上层液，移入另一试管中；

（4） 按上述自然沉降法（4）～（5）操作。

【操作方法二】

（1）取抗凝静脉血加入等量6%右旋糖酐溶液中，混匀；

（2）按操作方法一的（2）～（4）操作。