在ELISA的研发制备中尤为重要的就是它的指控流程，包括抗原设计及制备筛选，抗体制备，标准品的定量，检测液的优化，试剂盒的组装，以及各种性能的验证。对于科研工作者来说，要制备一个好的ELISA kit，需要具备敏感性高，特异性强，重复性好，并且其试剂稳定、易保存，操作简便等。下面来看一下ELISA的质控控制。



1. 抗原抗体选择



ELISA检测原理基于抗原抗体反应，其质量影响了试剂盒的性能。对于大分子蛋白抗原，多采用双抗体夹心法，使用优的抗体对，且至少有一种为单抗，配对筛选最佳信噪比的包被和检测抗体。对于抗原为多肽和小分子（或者偶联物），多采用竞争抑制法，抗体的是经过验证的单克隆抗体或者多克隆抗体。



2. 标准品



对于标准品定量的准确性，每个公司对于定量标准和方法可能会有不同，这是企业标准。试剂盒使用的标准品多为重组蛋白或者单价的小分子， 定量可参考国际标准品，国家标准物质信息网或者一些大公司，如R&D， Abcam等。标准品的定量直接会决定试剂盒最后样本的检测结果。



3. 天然样本验证分析



我们在选择样本时，避免使用有外源性污染的样本，避免血样本出现溶血、细菌污染，最好使用较新鲜样本，避免反复冻融。

血清是最为常见的检测样本，但是大约40%的血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果；常见的干扰物质有：类风湿因子RF、补体、交叉反应物质和异嗜性抗体等其他物质等。避免其发生的方法有：



①标本用联有热变性IgG的固相吸附剂处理。



②用2-C₂H₆OS加入到标本稀释液中使RF降解。



③56℃ 30 min加热血清使补体灭活。



在样本检测中，稀释对于实验的成功也至关重要，稀释过度以及稀释不足均有可能导致样本的测值低。Elisa 实验较为常见的一个现象就是钩状效应，即抗原与抗体比例不合适而导致假阴性的现象，抗原过量称为后带效应。当样本中目标物含量很高，而没有进行正确的稀释，就有可能会导致假阴性反应。