维生素B12的稀释倍数问题

清、寡、淡、饮

检测方法为GB/T 5009.217-2008，样品中维生素B12的含量约为1%，称取2.00g定容200ml，吸取20ml过免疫亲和柱，最后结果计算中稀释倍数f应该为多少啊？请各位前辈指导一下

yazhouhou

按照楼主的操作，f=10 =(200 mL) ÷ (20 mL)   。

但是，是不是，过柱液太浓了？涉及柱子的负载容量和上机液浓度超标液系列范围的事儿。

清、寡、淡、饮

yazhouhou 发表于 2022-3-19 13:14
按照楼主的操作，f=10 =(200 mL) ÷ (20 mL)   。

但是，是不是，过柱液太浓了？涉及柱子的负载容量和上 ...

是有点浓了，不过还没超标曲

yazhouhou

清、寡、淡、饮 发表于 2022-3-19 13:36
是有点浓了，不过还没超标曲

那可不像楼主所说的样品中1％VB12含量呀。

清、寡、淡、饮

yazhouhou 发表于 2022-3-19 13:48
那可不像楼主所说的样品中1％VB12含量呀。

标准上最后蒸干后用1ml  0.025%的三氟乙酸溶液溶解，然后进样20ul，这也要算到稀释倍数里面吗（多稀释50倍）

yazhouhou

清、寡、淡、饮 发表于 2022-3-19 15:43
标准上最后蒸干后用1ml  0.025%的三氟乙酸溶液溶解，然后进样20ul，这也要算到稀释倍数里面吗（多稀释50 ...

待测液与标液的上机相同细节不参与计算。
      柱子富集的VB12最终被溶解为1 mL，这个1mL已经被揉进公式了：公式里的A，可以理解为待测液浓度 μg/mL 乘以1 mL，得到待测液含有的VB12的质量μg数。

还是提醒楼主，如果“样品中维生素B12的含量约为1%”，应该在过免疫柱前增加稀释步骤。

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yazhouhou 发表于 2022-3-19 16:07
待测液与标液的上机相同细节不参与计算。
      柱子富集的VB12最终被溶解为1 mL，这个1mL已经被揉进公 ...

稀释了，称取的是0.04g定容100ml，提所说只是假如情况，便于我们分析

清、寡、淡、饮

yazhouhou 发表于 2022-3-19 16:07
待测液与标液的上机相同细节不参与计算。
      柱子富集的VB12最终被溶解为1 mL，这个1mL已经被揉进公 ...

公式里的A是直接把面积或者高度代进标准曲线方程计算得来的吗？实际上是浓度ug/ml，再乘以1ml得到含量ug

yazhouhou

清、寡、淡、饮 发表于 2022-3-19 17:08
稀释了，称取的是0.04g定容100ml，提所说只是假如情况，便于我们分析

“称取的是0.04g”，不妥当。称取样品质量太少，称量时的相对误差会较大，影响准确性。还是按照标准操作为好。对于高含量样品，应当通过增加稀释来调整浓度。

yazhouhou

清、寡、淡、饮 发表于 2022-3-19 17:10
公式里的A是直接把面积或者高度代进标准曲线方程计算得来的吗？实际上是浓度ug/ml，再乘以1ml得到含量ug

待测液响应信号，放到系列标准溶液浓度～响应信号体系里，得到待测液浓度 μg/ mL 。
乘以待测液体积1 mL，就是待测液中VB12的质量μg数，即过柱液中VB12的质量μg数  。
则，所称取样品中VB12 的质量就是其f倍。
最后，除以称样质量g数，得到样品中VB12浓度μg/g   。

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yazhouhou 发表于 2022-3-19 17:45
待测液响应信号，放到系列标准溶液浓度～响应信号体系里，得到待测液浓度 μg/ mL 。
乘以待测液体积1 m ...

对，是这个样子。但是我们部门有人认为待测液体积1ml，上机只吸取了20uL进样，这样就等于1ml没全都上机，相当于稀释了。我该怎么反驳

yazhouhou

清、寡、淡、饮 发表于 2022-3-21 08:05
对，是这个样子。但是我们部门有人认为待测液体积1ml，上机只吸取了20uL进样，这样就等于1ml没全都上机， ...

重点，上机测定的目的是，得到待测液的浓度。此时，连它是不是1mL、进针多少，都不管。
既然测浓度，不管进针多少体积，根本没有稀释。进针20 μL的浓度，就是那1 mL待测液的浓度。

不管是1 mL的待测上机液，还是排成一队每瓶10 mL的系列标准溶液，它们都以相同的上机细节（仪器条件相同，已知未知各液体都是相同进针体积，至于是20 μL还是10μL还是其他体积无所谓）上机测定。都像那位同事所说，都没有全部进入仪器。

 因为上机细节相同，这样的话，咱们就只关心，各液体浓度与响应信号之间的关系，从而推算出待测上机液的浓度。

 因为只测定浓度，所以此时是不管各液体自己的总体积的，比如原本1mL的待测液过滤时损失了半毫升、某瓶10 mL标准溶液打翻了流走了几毫升，都没有关系，咱们只关心它们的浓度。 

至于进针体积，是经过摸索确定的，以发挥仪器性能获得良好测定效果。测定时保持标液与样液相同就行了。

如果，同事纠结进样的20 μL、说f =200 mL ÷ 20 mL ×1 mL ÷20 μL，那么，同事就要另外解释计算公式里的A了。

咱们说，A是那1 mL待测液（即20 mL过柱液）里VB12的质量μg数。

那么，同事所说的A，应该是20 μL待测液里的VB12质量μg数。
则，从系列标液得到的数据，也要作出折算，标液浓度乘以进针体积20 μL，μg/mL ×20 μL  。

会发现，进针体积20 μL使用了2次，一上一下、一乘一除被约掉了，等于没用。

所以说，进针体积对含量计算对无所谓，上机细节不参与计算。这样的解析在之前的帖子里进行过了，其实掌握分析技术的早就懂得。